Effect of a phytogenic feed additives mixture on milk physico-chemical properties and biochemical parameters of Holstein cows / Efeito de uma mistura de aditivos fitogênicos alimentares nas propriedades físico-químicas do leite e parâmetros bioquímicos de vacas leiteiras da raça holandês

ABSTRACT: This study aimed to analyze the effect of phytogenic additives based on cardol, cardanol, and ricinoleic acid on the physico-chemical qualities and biochemical parameters of Holstein cow milk. Nineteen animals were divided into the control (GI) and treatment (GII) groups. Prior to the beginning of the experiment, sodium monensin was removed from the feed provided to the animals. This study consisted of two phases. In the first, animals from GI received the standard diet, without additives, while animals from GII received the standard diet supplemented with 10 g of phytogenic additives for 60 days. At the end of the first stage, the animals remained 30 days without receiving additives and in the second phase the groups were inverted, and the GII again received the phytogenic additive during the subsequent 60 days. Physical-chemical analyzes of milk were performed at moments 0, 15, 30, 45 and 60 days of the experiment and the blood parameters at times 0 and 60 days of the experiment were evaluated. There was no significant difference for the treatment x time interaction in any of the variables, but there was a trend between groups for the CCS parameter and there was a statistical difference for the protein, as well as for the AST. In this study it is observed that the addition of phytogenic additive modulating rumen fermentation based on cardol, cardanol and ricinoleic acid does not compromise, in general, the quality of milk, with positive results for some specific parameters such as protein content and aminotransferase.

RESUMO: Esse estudo teve por objetivo avaliar o efeito de um aditivo fitogênico a base de cardol, cardanol e ácido ricinoléico na qualidade físico-química do leite e perfil bioquímico de vacas da raça Holandês. Dezenove animais foram divididos em dois grupos: Grupo Controle (GI) e Grupo Tratado (GII). Previamente ao início do experimento, retirou-se a monensina sódica da ração fornecida aos animais. Este estudo consistiu de duas fases, sendo que na primeira fase, os animais do GI receberam a dieta padrão, sem aditivos, enquanto os animais do grupo GII receberam a ração padrão suplementada com 10 g dos aditivos fitogênicos durante 60 dias. Ao final da primeira etapa, os animais permaneceram 30 dias sem receber aditivos e na segunda fase os grupos foram invertidos, sendo que o GII novamente recebeu o aditivo fitogênico durante os 60 dias subsequentes. Foram realizadas análises físico-químicas do leite nos momentos 0, 15, 30, 45 e 60 dias do experimento e avaliados os parâmetros sanguíneos nos momentos 0 e 60 dias do experimento. Não se observou diferença significativa para a interação tratamento x tempo em nenhuma das variáveis, mas tendência entre grupos para o parâmetro de CCS, e houve diferença estatística para a proteína, assim como para a AST. Neste estudo observa-se que a adição de aditivo fitogênico modulador de fermentação ruminal a base de cardol, cardanol e ácido ricinoléico não compromete, de forma geral, a qualidade do leite, tendo resultados positivos para alguns parâmetros específicos como teor de proteína e aspartato aminotransferase.

Factors associated with the efficiency of acaricides on different populations of Rhipicephalus microplus / Fatores associados à eficiência de acaricidas sobre diferentes populações de Rhipicephalus microplus

Tick infestation causes major problems in cattle. Tick parasitism accounts for significant economic losses in many beef and dairy herds in the vast majority of the states in the Brazilian territory including the State of Santa Catarina in the southern region of the country. Tick resistance to several active principles occurs due to a number of factors including the indiscriminate, injudicious and inadequate use of tick insecticides. Considering the great importance of fighting off tick infestations in cattle, we evaluated the efficiency of 8 different topical active principles against the ixodid tick R. microplus and identified the main factors that contribute to the development of ticks that are resistant to acaricides in the farms and bovine herds studied. For such purpose, R. microplus telegionae were collected in 39 farms locates in different municipalities of the West of Santa Catarina, south Brazil. At the time of sample collection, information about the management, the history of the acar used in the herd, the number of annual applications of these pesticides, the frequency of acaricide rotation, and the frequency of technical monitoring for strategic tick control were retrieved. We collected this data in order determine contributing factors to the development resistant R. microplus populations. For the sensitivity profile of these ticks to a number of different acaricides tested, 10 engorged females for each principle and a control were used. The results of our study show that most associations between pyrethroids and organophosphates had an efficiency between 96.6% and 100% in the control of R. microplus except for the combination of Alfacipermetrine 15%, Ethion 16%, and Chlorpyrifos 8.5% that had 93.4% of efficiency. Among the chemicals not associated with any other type of compound, Amitraz 12.5% ​​was effective in 98.3% of the cases. In contrast, Cypermethrin 15% had an efficiency in only 25.8% of the farms/herds analyzed. Based on the results of the present study, we may infer that the methods of control and management used by producers may be related to the low indexes of resistance to topical acaricides in the different populations of ticks in the study area.

A infestação por carrapatos em bovinos gera grandes problemas, sendo esse parasito responsável por elevados prejuízos econômicos em diversos rebanhos de produção de corte e também de leite na maioria das regiões brasileiras, inclusive em Santa Catarina. A resistência dos carrapatos frente aos diversos princípios ativos pode ser decorrente de fatores como o uso indiscriminado de carrapaticidas, bem como a inadequada forma de aplicação dos mesmos. Tendo em vista a grande importância em combater essas infestações, buscou-se avaliar a eficiência de oito diferentes princípios ativos de contato contra o carrapato Rhipicephalus microplus, bem como identificar os principais fatores que possam contribuir com a seleção de carrapatos resistentes nas propriedades avaliadas. Para isso, teleóginas de R. microplus foram coletadas em 39 propriedades de diferentes municípios do Oeste de Santa Catarina. No momento da coleta também foram obtidas informações referentes ao sistema de manejo dos animais, histórico dos carrapaticidas utilizados, número de aplicações anuais, frequência de rodízios de acaricidas, e frequência de acompanhamento técnico para controle estratégico, com a finalidade de evidenciar os diferentes fatores que possam estar contribuindo para o surgimento de eventual resistência das populações do R. microplus. A avaliação de suscetibilidade foi realizada através da técnica de biocarrapaticidograma, utilizando 10 teleóginas ingurgitadas para cada princípio e mais o controle. Dentre os principais resultados obtidos, a maioria das associações entre piretróides e organofosforados demonstraram ter eficiência entre 96,6% e 100%, com exceção da associação de Alfacipermetrina 15%, Ethion 16% e Clorpirifós 8,5% com 93,4% de eficiência. Dentre as bases químicas sem nenhum tipo de associação o Amitraz 12,5% demonstrou ser eficaz em 98,3%, em contrapartida a Cipermetrina 15% teve eficiência em apenas 25,8% das propriedades analisadas. A partir dos resultados obtidos, pode se afirmar que as formas de controle e manejo adotados pelos produtores podem estar relacionadas com os baixos índices de resistência aos carrapaticidas de contato, nas diferentes populações de carrapato na região do estudo.

Prevalência de anticorpos e fatores de risco associados à infecção por Toxoplasma gondii em galinhas domésticas da zona rural de Santa Maria, Rio Grande do Sul / Prevalence of antibodies and risk factors associated with infection by Toxoplasma gondii in free range chickens of rural area of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil

RESUMO: Toxoplasma gondii é um protozoário apicomplexa que infecta animais de sangue quente, podendo ser considerado um dos principais parasitas capazes de infectar os seres humanos. Galinhas domésticas podem ser facilmente infectadas por protozoários, uma vez que estas podem ingerir oocistos encontrados no solo, sendo consideradas boas indicadoras de contaminação ambiental por T. gondii. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-T. gondii em galinhas domésticas criadas extensivamente e avaliar os fatores de risco associados ao protozoário, na zona rural de Santa Maria, RS, Brasil. No período de março de 2013 a fevereiro 2014 foram coletadas 597 amostras de sangue de galinhas domésticas em 74 propriedades, oriundas de nove estratos que representam cada distrito da zona rural. Para avaliar os fatores de risco, nessas propriedades foi aplicado um questionário epidemiológico aos moradores. As amostras de soro foram testadas por imunofluorescência indireta, e 49,2% (294/597) foram positivas para anticorpos anti-T. gondii, com títulos variando de 16 a 4096. Das 74 propriedades analisadas, em 63 (85,1%) houve relatos que os gatos têm acesso ao deposito de alimentos, com associação significativa quando associado à presença de galinhas positivas (p=0,04) e o OR de 4,07. A variável "abate de animais" (aves e bovinos), em 51 (68,9%) das propriedades foi relatado o abate de bovinos e aves na propriedade, com valor de p significativo (p=0,05). A maioria das propriedades 59 (79,7%) foi relatada a presença de gatos domésticos, o que poderia estar associada com a alta soroprevalência encontrada em galinhas e a taxa de contaminação ambiental. A elevada prevalência de anticorpos encontrada neste estudo, além da alta frequência de propriedades com casos positivos, sugere uma grande contaminação ambiental nos distritos pesquisados, sendo assim um risco potencial para a saúde humana e animal.

ABSTRACT: Toxoplasma gondii is an apicomplex protozoan that infects warm-blooded animals and can be considered a major parasite capable of infecting humans. Domestic chickens can be easily infected by protozoa, since they can ingest oocysts found in the soil and are considered good indicators of environmental contamination by T. gondii. The aim of this study was to determine the presence of anti-T. gondii antibodies in free range chickens and to evaluate the risks factors associated with the protozoan in rural area of Santa Maria, RS, Brazil. From March 2013 to February 2014, 597 blood samples from domestic chickens were collected from 74 farms, from nine layers representing each district in the rural area. To evaluate the risk factors, in these farms an epidemiological questionnaire was applied to the residents. Serum samples were tested by indirect immunofluorescence and 49.2% (294/597) were positive for anti-T.gondii antibodies, with titres varying from 16 to 4096. Of the 74 analyzed farms, 63 (85.1%) reported that cats had access to food deposits, with a significant association when positive chickens were present (p = 0.04) and the OR of 4.07. The variable "slaughter of animals" (poultry and cattle) in 51 (68.9%) of the farms was reported the slaughter of cattle and birds in the farm, with significant p value (p = 0.05). Most farms 59 (79.7%) reported the presence of domestic cats, which could be associated with the high seroprevalence found in chickens and the rate of environmental contamination. The high prevalence of antibodies found in this study, in addition to the high frequency of farms with positive cases, suggests a great environmental contamination in the studied districts, thus being a potential risk to human and animal health.

Virulência e multiplicação de isolados de Toxoplasma gondii da região central do Rio Grande do Sul / Virulence and multiplication of Toxoplasma gondii isolates from the central region of Rio Grande do Sul, Brazil

O protozoário Toxoplasma gondii possui a capacidade de infectar diversas espécies animais, geralmente causando distúrbios reprodutivos. Quatro diferentes isolados de T. gondii - Pains #1 (P1), Pains #2 (P2), Santa Flora #1 (SF1) e Santa Flora #306 (SF306) - foram avaliados, após prévia genotipagem. A capacidade de multiplicação e virulência destes isolados foi analisada in vitro (células Vero) e in vivo (camundongos), sendo realizadas 3 passagens para cada isolado em cada modo avaliado, sendo sempre inoculada a dose de 1x104 taquizoítos em todas as passagens. Os camundongos eram observados diariamente, quanto à presença de sinais clínicos e ocorrência de mortalidade após inoculação dos taquizoítos. Os isolados SF1 e SF306, foram os que apresentaram maior multiplicação média do número total de taquizoítos em cada uma das 3 diferentes passagens realizadas para cada um dos isolados tanto in vitro quanto in vivo. Os primeiros sinais clínicos observados nos camundongos ocorreram entre os dias 5 a 11, após inoculação, com mortalidade acontecendo entre os dias 6 a 15, após inoculação. Assim, a multiplicação parasitária in vitro é semelhante à multiplicação in vivo destes isolados de T. gondii; diferentes isolados com o mesmo genótipo apresentam comportamento de virulência semelhante, caracterizando o isolado SF1 como mais virulento para camundongos.(AU)

The protozoan Toxoplasma gondii has the ability to infect several animal species, usually causing reproductive disorders. Four different isolates of T. gondii - Pains #1 (P1), Pains #2 (P2), Santa Flora #1 (SF1) and Santa Flora #306 (SF306) were evaluated with prior genotyping. Their virulence and multiplication capacity were analyzed in vitro (Vero cells) and in vivo (mice). For each isolate, three passages were performed with dose inoculation 1x104 tachyzoites at each passage. The mice were daily observed to verify of clinical signs and occurrence of mortality after tachyzoites inoculation. The SF1 isolate and SF306 isolate, presented the highest multiplication of the total tachyzoites number in each of the 3 different passages performed in vitro and in vivo. The initial clinical signs in mice were observed between 5 and 11 days, and occurring mortality between 6 and 15 days, after inoculation. Thus, the parasitic multiplication of theses isolates is similar in vitro and in vivo; different isolates within the same genotype have a similar virulence and the SF1 isolate is the most virulent for mice.(AU)

Parasites in dairy cattle farms in southern Brazil / Los parásitos en las granjas de ganado lechero en el sur de Brasil

ABSTRACT Objective. The aim of this study was to investigate the relation among type and size of the farms related to the management of production and especially the presence and control of parasites. Materials and methods. To accomplish the above, 65 farms were used: 56 of semi-extensive system (cows in pastures), classified as low density farms (n=15, up to 15/cows), medium density farms (n=20; between 16-30/cows) and large density farms (n=21; over 31/cows). It was also included nine farms freestall system (n=9; confinement, over 70 cows) as part of the study population. Results. In the farms visited for the study can be noticed that the farms that had the higher level of technological improvement in managements practice were properties in high level (3) and freestall (4). In most of the farms there were observed the presence of ticks and flies, regardless of density of farms. Feces samples collected from 650 cows (n=10/farm), and analyzed using McMaster showed that 191 cows were positive for parasites. The presence of antibodies in bulk milk tank occurred in 36 (55.38%; CI95% 42-67) to Neospora caninum of the studied farms. Conclusions. We also conclude that N. caninum is present in cattle herds in Western Santa Catarina, and may be linked to reproductive problems in cows.

RESUMEN Objetivo. El objetivo de este estudio fue investigar la relación entre el tipo y el tamaño de las fincas relacionadas con la gestión de la producción, y especialmente, la presencia y el control de los parásitos. Materiales y métodos. Para lograr lo anterior, se utilizaron 65 granjas: 56 de semi-extensivo sistema (vacas en los pastos), clasificado como granjas de baja densidad (n=15, hasta 15/vacas), las granjas de densidad media (n=20; entre 16-30/vacas) y granjas grandes densidad (n=21; más de 31/vacas). También se incluyeron nueve del sistema de granjas freestall (n=9; confinamiento, más de 70 vacas) como parte de la población de estudio. Resultados. En las granjas visitadas se pudó notar que tenían el mayor nivel de mejora tecnológica en la práctica de gestiones eran propiedades en alto nivel (3) y estabulación libre (4). En la mayoría de las granjas no se observó la presencia de garrapatas y moscas, independientemente de la densidad de las explotaciones. Muestras de heces recogidas de 650 vacas (n = 10/granja), y analizados usando McMaster mostró que 191 vacas fueron positivas para parásitos. La presencia de anticuerpos en tanque de leche a granel se produjo en 36 (55.38%; IC95% 42-67) por Neospora caninum de las fincas estudiadas. Conclusiones. Se concluye que N. caninum está presente en los rebaños de ganado en el oeste de Santa Catarina, y puede estar vinculado a problemas reproductivos en vacas.

Biochemical detection of E-ADA on Neospora caninum tachyzoites and the effects of a specific enzymatic inhibitor / Detección bioquímica de E-ADA en taquizoitos de Neospora caninum y los efectos de un inhibidor enzimático específico

Objective. This study aimed to investigate the presence and activity of the ecto adenosine deaminase (E-ADA) enzyme in tachyzoites of Neospora caninum (Nc-1 strain), as well as to assess the activity of a well-known E-ADA inhibitor, the deoxycoformycin. Materials and methods. The parasites were grown in cell culture, being subsequently separated in a pellet of tachyzoites, on which the E-ADA activity was tested using the concentrations 0 (control), 0.2, 0.4 and 0.8 mg mL-1. Results. The E-ADA showed high activity, progressively increasing its activity according to the enhancement of the protein concentration. The test was carried out with different concentrations of deoxycoformycin, showing that it was able to inhibit the E-ADA present on the free form of the parasite. Conclusions. Based on these results we conclude that the E-ADA is present on tachyzoites of N. caninum, and deoxycoformycin is able to inhibit this enzyme. In this sense, knowing the negative impact of N. caninum on reproductive issue in cattle (mainly abortion), might it is an alternative in order to deal with this parasitic infection.

Objetivo. Este estudio tuvo como objetivo investigar la presencia y la actividad de la adenosina deaminasa (E-ADA) en taquizoitos de Neospora caninum (Nc-1 cepa), así como ensayar un conocido inhibidor de estas enzimas. Material y métodos. Los parásitos se multiplicaron en cultivo celular y posteriormente fueron separados en un sedimento de taquizoitos. La actividad de E-ADA fue probada en el parásito, usando concentraciones de 0 (control), 0.2, 0.4 y 0.8 mg mL-1. Resultados. El E-ADA tenía una alta actividad aumentó progresivamente de acuerdo con la concentración de proteínas. La prueba se llevó a cabo con diferentes concentraciones del inhibidor E-ADA (desoxicoformicina) y fue capaz de inhibir la presente E-ADA en el parásito. Conclusiones. Por la observación de los resultados se concluye que la enzima E-ADA está presente en taquizoítos de N. caninum, y desoxicoformicina es capaz de inhibir la acción de la enzima. En este sentido, conocer el impacto negativo del parásito en los problemas productivos y reproductivos en el ganado (principalmente abortos), estos resultados pueden ser una alternativa para evitar esta enfermedad parasitaria.

Seroprevalence and risk factors for Neospora caninum in goats in Santa Catarina state, Brazil / Soroprevalência e fatores de risco para Neospora caninum em caprinos no estado Santa Catarina, Brasil

Neosporosis is an infectious disease caused by the parasite Neospora caninum. Knowledge regarding neosporosis in goats is still quite limited, especially in the state of Santa Catarina (SC), southern Brazil. Therefore, this study aimed to assess the seroprevalence and risk factors for N. caninum in goats in the western and mountain regions of SC. Blood samples were collected from 654 goats in 57 municipalities. The indirect immunofluorescence test was used for antibody detection against N. caninum. Thirty samples (4.58%) were seropositive, with titers ranging from 1:50 to 1:6400. An epidemiological survey was also conducted in order to identify risk factors for neosporosis in goats. It was found that reproductive problems on the farms, as well as the diet and direct contact with dogs were casual risks for neosporosis. These results indicate that N. caninum infects goats in these regions, which may lead to reproductive problems.

Neosporose é uma doença infecciosa causada pelo parasito Neospora caninum. Nos caprinos, as informações sobre neosporose ainda são bastante limitadas, especialmente no Estado de Santa Catarina (SC), Sul do Brasil. Em virtude disso, este estudo teve como objetivo avaliar a soroprevalência e os fatores de risco envolvidos na infecção por N. caninum em caprinos das regiões Oeste e Planalto Serrano do Estado de SC. Amostras de sangue foram coletadas de 654 caprinos em 57 cidades. A técnica de imunofluorescência indireta (RIFI) foi usada para a detecção sorológica de anticorpos contra N. caninum. Trinta amostras (4,58%) foram soropositivas para o agente infeccioso com títulos variando entre 1:50 a 1:6400. Durante a coleta de sangue, um levantamento epidemiológico foi realizado para identificar fatores de risco para neosporose em caprinos. Problemas reprodutivos presentes nas fazendas, bem como a dieta e o contato direto com cães foram detectados como fatores de risco para a doença. Os resultados indicam que N. caninum infecta cabras nas regiões avaliadas, o que pode estar relacionado a problemas reprodutivos nesta espécie.

Detecção de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em felinos domésticos / Detection of anti-Toxoplasma gondii antibodies in domestic felines

A toxoplasmose é uma protozoonose que acomete uma variedade de animais de sangue quente e tem como agente etológico o protozoário Toxoplasma gondii, parasito intracelular obrigatório. Dentre a grande diversidade de animais susceptíveis, os felinos têm um importante papel na disseminação da infecção pelo T. gondii, pois são os únicos hospedeiros definitivos do parasito. Com o objetivo de verificar a ocorrência do T. gondii em gatos domésticos da microrregião de Santa Maria/RS, Brasil, foram coletadas 180 amostras de soros de felinos atendidos no Hospital Veterinário Universitário da UFSM. Estas amostras foram avaliadas no Laboratório de Doenças Parasitárias para detecção de anticorpos anti-T. gondii pela técnica de imunofluorescência indireta (IFI). Das 180 amostras analisadas, 39 (21,6 %) apresentaram anticorpos anti-T. gondii com títulos iguais ou superiores a 64. Os resultados demonstram a alta prevalência de felinos anticorpos positivos, o que sugere a participação destes animais na contaminação ambiental, indicando a importância destes na epidemiologia da doença.

Toxoplasmosis is a protozoiasis that affects a variety of warm-blooded animals and its etiologic agentis the protozoan Toxoplasma gondii, an obligatory intracellular parasite. Among the great diversity ofsusceptible animals, felines have an important role in the dissemination of T. gondii infection becausethey are the unique definitive hosts of this parasite. In order to verify the occurrence of T. gondii infectionin domestic cats in micro-Santa Maria, RS-Brazil, 180 serum samples were collected from cats examinedat the Veterinary Teaching Hospital - UFSM. These samples were tested in the Laboratory of ParasiticDiseases for detecting anti-T. gondii antibodies by indirect immunofluorescence assay (IIF ) . Of 180samples, in 39 (21.6 %) were detected anti-T. gondii antibodies, reactive in titers equal or higher than 64.This study demonstrates the high prevalence of antibody-positive felines, suggesting the participation ofthese animals in environmental contamination, and indicates their importance in the epidemiology of thedisease.

Occurrence of antibodies to Toxoplasma gondii in rheas (Rhea americana) and ostriches (Struthio camelus) from farms of different Brazilian regions / Ocorrência de anticorpos Toxoplasma gondii em emas (Rhea americana) e avestruzes (Struthio camelus) de propriedades de diferentes regiões brasileiras

This study aimed to verify the occurrence of antibodies against Toxoplasma gondii in rheas (Rhea americana) and ostriches (Struthio camelus) commercially breeding in Brazil. Blood samples from 20 rheas and 46 ostriches (young and adults) were serologically tested using a technique known as modified agglutination test (MAT) at an initial titration of 1:16 for ostriches and 1:25 for rheas. Antibodies against T. gondii were found in 50% (10/20) of the rheas, with titers ranging from 1:25 to 1:6,400. The incidence of antibodies against T. gondii in ostriches was 17.4% (8/46) with titers ranging from 1:16 to 1:256. Birds showing titers higher than 1:200 for T. gondii were mainly the young ones. Therefore, rheas and ostriches may be parasitized by T. gondii, showing high levels of antibodies against this parasite.

Este estudo teve como objetivo verificar a presença de anticorpos contra o Toxoplasma gondii em emas (Rhea americana) e avestruzes (Struthio camelus) criados comercialmente no Brasil. Amostras de sangue de 20 emas e 46 avestruzes (jovens e adultos) foram testadas sorologicamente pela técnica conhecida como teste de aglutinação modificada (MAT) em titulações iniciais de 1:16 para avestruzes e 1:25 para emas. Anticorpos contra T. gondii foram encontrados em 50% (10/20) das emas com títulos variando de 1:25 a 1:6.400. A incidência de anticorpos contra T. gondii em avestruzes foi de 17,4% (8/46) com os títulos oscilando entre 1:16 e 1:256. Aves jovens foram aquelas que apresentaram títulos superiores a 1:200 para T. gondii. Portanto, emas e avestruzes podem ser parasitados por T. gondii, apresentando elevados níveis de anticorpos contra o parasita.

Detecção de ácidos nucleicos em tecidos de gerbils submetidos à infecção aguda por Neospora caninum / Detection of nucleic acids in tissues of gerbils submitted to acute infection with Neospora caninum

Neospora caninum é um protozoário de grande importância na pecuária, por determinar problemas reprodutivos principalmente em bovinos. Os gerbils (Meriones unguiculatus) podem atuar como modelos experimentais para reproduzir a neosporose aguda de bovinos. Neste trabalho, foram formados dois grupos de gerbils (n=10), inoculados com taquizoítos de N. caninum (cepa NC-1) nas doses de 5x10(6) taquizoítos ml-1 (G1) ou de 5x10(5) taquizoítos ml-1 (G2), doses capazes de induzir infecção aguda. Cérebro, medula espinhal, coração, pulmão, fígado, rins e baço foram coletados e a técnica de PCR foi realizada a partir das amostras de tecidos e órgãos. Na maioria dos animais, o DNA do N. caninum foi detectado pelo menos em cinco tecidos, considerando ambos os grupos (12/20; 60%). No grupo 1, a frequência de detecção de DNA, na totalidade das amostras, foi maior (52/70; 74,28%) quando comparada ao grupo 2 (38/70; 54,28%). A partir desses resultados, pode-se afirmar que o protozoário replicou eficientemente após inoculação e se disseminou pelos tecidos. Além disso, demonstrou-se que gerbils podem ser utilizados como modelo de infecção aguda pelo N. caninum, apresentando sinais clínicos da neosporose.

Neospora caninum is a protozoan of great importance for livestock, mainly by causing reproductive diseases in cattle. Gerbils (Meriones unguiculatus) may be a model to reproduce experimental acute neosporosis of cattle. In this study two groups of gerbils were formed (n=10) and gerbils were inoculated with N. caninum tachyzoites (NC-1 strain) at two different doses appropriate to cause acute neosporosis: 5x10(6) tachyzoites ml-1 (G1) or 5x10(5) tachyzoites ml-1 (G2). Brain, spinal cord, heart, lung, liver, kidneys and spleen were collected and PCR was performed using samples of these tissues and organs. DNA of N. caninum was detected in at least five tissues for most animals (12/20; 60%) considering both groups. In group 1, the frequency of DNA detection, evaluating all samples, was higher (52/70; 74.28%) compared to group 2 (38/70; 54.28%). These results showed that the protozoan replicated efficiently after inoculation spreading by several tissues. Also, was demonstrated that gerbils can be used as model for acute infection with N. caninum showing clinical signs of neosporosis.

Reação de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras coletivas de leite / Indirect fluorescent antibody test to detection of Neospora caninum antibodies in samples of bulk milk

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras coletivas de leite, através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para isso, foram coletadas amostras do leite dos tanques refrigerados de 36 rebanhos, das quais foram selecionadas 14 para coletas de amostras individuais de soro sanguíneo e de leite das vacas. Encontrou-se correlação em 12 dos 14 rebanhos selecionados para a amostragem individual dos animais, em comparação à detecção de anticorpos nas amostras coletivas de leite. Foi observada uma concordância de 76 por cento comparando-se o resultado das amostras coletivas com os resultados individuais de leite. Observaram-se baixos títulos de anticorpos (50) no soro sanguíneo dos animais soropositivos, cujos resultados da RIFI no leite coletivo e no sangue foram discordantes. Assim, a partir dos resultados deste estudo, pode-se concluir que a utilização de testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite através da RIFI pode ser uma opção ao diagnóstico para a triagem de rebanhos positivos bem como para estudos epidemiológicos.

The aim of this study was to determine the presence of anti-N. caninum in the bulk milk samples by indirect immunofluorescence assay (IFAT). For this, it was collected samples of milk from refrigerated tanks from 36 herds, of which 14 were selected for sampling of individual blood serum and milk of cows. It was found concordance for 12 of the 14 herds selected for samples of individual animals, compared to the detection of antibodies in the bulk milk samples. Concordance was of 76 percent when comparing the results of the pooled sample with the results of individual milk. It was observed low antibody titers (50) in the serum of animals positive whose results in IFA of bulk milk and blood were discordant. Thus, with the results of this study, it can be concluded that the use of serological tests for detection of anti-N. caninum in the bulk milk samples from the IFAT could be an alternative diagnosis for the screening of positive herds as well as for epidemiological studies.

Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de imunofluorescência indireta / Detection of antibodies against Neospora caninum in individual and bulk milk samples from cattle by the technique of indirect immunofluorescence assay

Neospora caninum is a major causative agent of reproductive losses in cattle and the diagnosis of neosporosis is essential for control and eradication programs. Therefore, this study aimed to: (1) standardize an indirect immunofluorescence assay (IFAT) for detection of antibodies against N. caninum in bovine milk, starting from a standard IFAT used for blood serum samples; (2) check the agreement between antibodies detection by IFAT in blood serum and in milk of cows; (3) evaluate the suitability of IFAT for detection of anti-N. caninum antibodies in bulk milk samples. We tested samples of blood serum and milk collected from 112 lactating cows for detection of antibodies against N. caninum, furthermore, six bulk milk samples, each one corresponding to each dairy farm studied. Agreement between the detection of antibodies in blood serum (with antibody titer >50) and in milk, with 90 percent of sensitivity and 100 percent of specificity for the IFAT in milk samples were found in 78 percent of the animals. However, for cows with antibody titers >100 in blood serum, the agreement, the sensitivity and the specificity of the IFAT in milk were of 100 percent. It is shown that, considering the dairy farm conditions. The most appropriate diagnostic approach to be adopted regarding the collection of blood serum or milk can elect for search anti-N. caninum antibodies by IFAT. Moreover, detection of antibodies in bulk milk samples can serve for diagnosis and screening of herds with infected animals.

Neospora caninum é um agente envolvido em perdas reprodutivas em bovinos. O diagnóstico dessa infecção é de grande importância, principalmente para programas de erradicação e controle. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: (1) adaptar uma reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-N. caninum no leite, a partir de uma RIFI padronizada para a detecção desses anticorpos no soro sanguíneo, (2) analisar a concordância entre a detecção desses anticorpos pela RIFI no soro sanguíneo e no leite de fêmeas bovinas, (3) avaliar a viabilidade da RIFI para a detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite. Foram testadas amostras de soro sanguíneo e de leite, coletadas de 112 vacas em lactação, e seis amostras coletivas de leite, correspondentes a cada uma das propriedades avaliadas. Encontrou-se 78 por cento de concordância entre a detecção de anticorpos no soro sanguíneo (com título de anticorpos >50) e no leite, com sensibilidade de 90 por cento e especificidade de 100 por cento para a RIFI nas amostras de leite. Entretanto, para as vacas com títulos de anticorpos >100 no soro sanguíneo, tanto a concordância como os valores de sensibilidade e especificidade da RIFI no leite foram de 100 por cento. Todas as amostras coletivas de leite foram positivas na RIFI. Isso demonstra que, conforme a propriedade pode-se eleger com segurança qual a melhor abordagem diagnóstica a ser adotada em relação à coleta de soro sanguíneo ou de leite para a pesquisa de N. caninum pela RIFI. Além disso, a determinação da presença de anticorpos em amostras coletivas de leite pode servir para diagnóstico e triagem de rebanhos com animais infectados.

Ação acaricida in vitro de Tropaeolum majus sob teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus / in vitro acaricidal effect of Tropaeolum majus on the engorged female of Rhipicephalus (Boophilus) microplus

O objetivo desse estudo foi o de avaliar a eficácia acaricida in vitro do extrato aquoso e etanólico a 70 por cento da Tropaeolum majus em teleóginas do Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Extrato das partes aéreas (caule e folhas) e de flores foram testados na concentração final de 2 por cento. A coleta de teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi realizada em propriedades do município de São Francisco de Assis e São Pedro do Sul, Rio Grande do Sul, Brasil. O extrato das partes aéreas em etanol a 70 por cento alcançou eficácia de 99,1 por cento. Esse estudo é o primeiro relato de ação carrapaticida de Tropaeolum majus.

The aim of this study was to evaluate the in vitro acaricide effect of aqueous and ethanolic extracts of Tropaeolum majus on Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females. Extracts from the aerial parts (stems and leaves) and from the flowers were tested at a final concentration of 2 percent. The Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females were collected in farms in two municipalities (São Francisco de Assis and São Pedro do Sul), in Rio Grande do Sul state, Brazil. An efficacy of 99,1 percent was found using extract of aerial parts in ethanol at 70 percent. This is the first report of acaricidal effect of Tropaeolum majus.

Ação anti-helmíntica de diferentes formulações de lactonas macrocíclicas em cepas resistentes de nematódeos de bovinos / Anthelmintic action of different formulations of macrocyclic lactones on resistant strains of nematodes of cattle

As lactonas macrocíclicas (LMs) (avermectinas e milbemicinas) são endectocidas amplamente utilizados em animais e em algumas parasitoses humanas. Em bovinos, a resistência parasitária às LMs é emergente, e o surgimento de formulações que diferem nas suas propriedades farmacológicas tornou complexa a escolha da droga mais indicada a cada caso. Com o objetivo de avaliar possíveis alternativas para recuperar a eficácia de LMs sobre cepas resistentes de nematódeos gastrintestinais, testaram-se, neste estudo, dez diferentes tratamentos a base de LMs sobre uma população de nematódeos gastrintestinais de bovinos a qual, sabidamente, sofrera pressão de seleção por avermectinas a 1 por cento. Adicionalmente, testou-se um benzimidazol. A eficácia das drogas foi calculada com base na redução de ovos por grama de fezes (OPG) dos bovinos. A resistência de cada gênero foi avaliada por meio de identificação de larvas, obtidas de cultivos nas fezes, pré- e pós-tratamentos. Não se obteve a eficácia desejada com o emprego de avermectinas de longa ação - com alta concentração e em associação - ou mesmo, com a aplicação de superdoses. Os gêneros Cooperia spp., Haemonchus spp. e Trichostrongylus spp. foram resistentes às avermectinas, e Ostertagia spp. à ivermectina. Observou-se que, uma vez estabelecida a resistência parasitária a LMs a 1 por cento, a aplicação de fármacos, deste mesmo grupo químico, ainda que em formulações mais concentradas, asso-ciações ou superdoses, pode não resultar na eficácia esperada.

The macrocyclic lactones (MLs) (avermectins and milbemycins) are endectocides broadly used in livestock and in some parasitic diseases of humans. In cattle, parasite resistance to MLs is emerging, and the appearance of formulations that differ in their pharmacological properties become complex the choice of the most appropriate drug to each case. In order to evaluate possible alternatives to restore the effectiveness of MLs on resistant strains of gastrointestinal nematodes, were tested, in this study, ten different treatments based on the MLs on a population of gastrointestinal nematodes of cattle which, known, was under pressure of selection by 1 percent avermectins. Additionally, was tested a benzimidazole. The efficacy of the drugs was calculated with basis on the reduction of eggs per gram of feces (EPG) of cattle. The resistance of each genus was evaluated by identification of the larvae, obtained from culture in the feces, pre- and post-treatments. The desired efficacy was not obtained using long action avermectins - with high concentration and in association - even with the application of high doses. The genera Cooperia spp., Haemonchus spp. and Trichostrongylus spp. were resistant to avermectins, and Ostertagia spp. to ivermectin. It was observed that, once established parasite resistance to the 1 percent MLs, the application of drugs, of this same chemical group, even in formulations of high concentration, association or in high doses, may not result in the expected efficacy.

Suscetibilidade de linhagens celulares e cultivos primários ao Neospora caninum / Susceptibility of cell lines and primary cell cultures to Neospora caninum

O Neospora caninum é um protozoário de ampla distribuição e grande importância na bovinocultura, principalmente pelas perdas reprodutivas que produz. Cultivos celulares são utilizados para o isolamento e a multiplicação do agente in vitro, com diversas finalidades. Este trabalho teve como objetivo avaliar a suscetibilidade de diferentes cultivos celulares à infecção pelo N. caninum. Dentre oito cultivos testados, quatro apresentaram boa susceptibilidade ao N. caninum: células VERO (produção de 21,2 taquizoítos/célula), MA-104 (17,1), cultivo primário de testículo (16,3) e pulmão bovino (13,6). Cultivo primário de rim bovino (8,2), células MDBK (5,1) e RK-13 (0,4) apresentaram baixa sensibilidade, enquanto células MDCK não produziram taquizoítos viáveis. Os resultados obtidos demonstram que as células MA-104 apresentaram suscetibilidade semelhante a das células VERO - linhagem tradicionalmente utilizada para o cultivo desse protozoário. Pela maior facilidade de cultivo, rápida multiplicação, menor exigência nutricional e produção de taquizoítos em níveis semelhantes às células VERO, as células MA-104 demonstraram ser adequadas para a manutenção e multiplicação do N. caninum in vitro.

Neospora caninum is a protozoan of wide distribution and great importance to the cattle industry, mainly due to its associated reproductive losses. Cultured cells are widely used for isolation and multiplication of the agent in vitro with several purposes. Thus, this study aimed to evaluate the susceptibility of different cell cultures to infection by N. caninum. Among the cell cultures tested, four presented good susceptibility to the agent: cell lines VERO (yield of 21.2 taquizoites/cell) and MA-104 (17.1); primary bovine testicle (16.3) and lung cells (13.6). Primary bovine kidney (8.2 taquizoites/cell), MDBK (5.1) and RK-13 cell lines (0.4) presented moderate to low sensitivity. No viable taquizoites were detected in the culture of MDCK cells. These results demonstrate that MA-104 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to VERO cells, which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Together with its easy manipulation, fast multiplication and relatively low nutritional requirements, these results indicate that MA-104 cells are adequate for multiplication of N. caninum in vitro.

Eficiência in vitro de acaricidas sobre carrapatos de bovinos no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil / In vitro evaluation of acaricides efficiency to bovine's ticks of Rio Grande do Sul State, Brazil

A infestação por carrapatos em bovinos é responsável por perdas econômicas significativas à indústria animal em várias regiões brasileiras, incluindo o Rio Grande do Sul. As perdas se devem ao stress, a perdas de peso e a injúrias na pele, bem como aos custos com tratamentos. O uso indiscriminado de carrapaticidas tem contribuído para o aparecimento da resistência genética dos ixodídeos a várias drogas, representando um sério problema no controle de carrapatos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a susceptibilidade das diferentes espécies de campo de Rhipicephalus (Boophilus) microplus aos acaricidas usados nos controles dos parasitas. Para tanto, amostras de carrapato foram coletadas em 42 propriedades localizadas em diferentes municípios do Estado para a realização do teste de imersão de teleóginas (biocarrapaticidograma). A associação do amitraz e do clorpirifós resultou na droga que apresentou maior eficácia em 100 por cento das propriedades testadas (11/11). Associações com cipermethrina-clorpirifós-citronelol foram eficientes nos carrapatos em 61 por cento das propriedades (25/41) e cipermetrina-ethion, em 37 por cento (10/27). A cipermetrina foi eficiente em 20,7 por cento (6/29) e o amitraz, um dos produtos mais utilizados nas propriedades, foi eficiente em 14,2 por cento (6/42) das propriedades. Os resultados demonstraram que muitas drogas utilizadas no controle do R. (B.) microplus no Estado apresentaram baixa eficácia, conforme os resultados dos testes in vitro. A baixa eficácia das drogas provavelmente se deve à resistência genética desenvolvida pelos parasitas devido ao uso indiscriminado dos carrapaticidas a campo.

Infestation by ticks is responsible for significant economic losses to the cattle industry in several regions, including Rio Grande do Sul (RS) state. Losses may be derived from animal stress, weight loss and skin damage, as well as from costs with treatment. The indiscriminated use of pesticides against these parasites has resulted in high levels of genetic resistance to several drugs, representing a problem for disease control. Thus, the objective of this research was to evaluate the susceptibility of field specimens of Rhipcephalus (Boophilus) microplus to the acaricides used in the control of the parasite. Female ticks obtained from 42 farms in different counties of RS were submitted to the engorgeted female immersion test, to estimate the resistance of the parasite to the drugs. Amitraz in combination with chlorpyriphos was the most efficient drug, acting effectively in ticks from 100 percent of the tested farms (11/11). Associations of cypermethrin-chlorpyriphos-citronelol were efficient in ticks from 61 percent of the farms (25/41) and cypermethrin-ethion in 37 percent (10/27). Cypermethrin alone was efficient in 20,7 percent (6/29) and Amitraz. one of the most used products, was efficient in ticks from only 14,2 percent (6/42) of the farms. These results demonstrate that most drugs used in the control of R. B. microplus in the state present low efficacy, as measured by in vitro tests. The low drug efficacy is probably derived from the genetic resistance developed by the parasites due to the indiscriminated and inadequate use of these acaricides in the field.